茉莉花茶、绿茶的免疫调节和抑菌效应的实验研究

发布时间：2011-07-04 00:00:00

1 广西医科大学化学教研室 2 广西医科大学病理生理教研室、临床免疫研究室
(南宁 530021)

摘要目的：观察茉莉花茶、绿茶浸出液的免疫调节和抑菌效应。方法：配制系列浓度的茉莉花茶、绿茶浸出液，观察其对中性粒细胞吞噬实验以及淋巴细胞转化实验的影响以及对多种细菌增殖的抑制效果。结果：较高浓度茉莉花茶、绿茶浸出液均可以明显提高脾淋巴细胞转化率，两者无显著差异；但对中性粒细胞吞噬率无明显影响，对多种细菌的抑菌圈直径是6.0mm至13.0mm。结论：茉莉花茶、绿茶浸出液均有一定的免疫促进效应和抑菌趋势。

关键词：茉莉花茶绿茶免疫抑菌

绿茶是未经发酵处理的山茶属小叶茶的干燥叶片，是大众喜爱的保健茶品，在绿茶中加入茉莉花制成的茉莉花茶，因其特有花香味而为众多的饮茶者喜爱。本实验采用两者的浸出液进行细胞免疫和抑菌方面实验，观察两者的生理与生物学性状，探讨其保健效应的可能机理。
1、材料与方法
1.1 实验茶叶与浸出液制备：横县绿茶与茉莉花茶，由横县茶协会提供。绿茶与茉莉花茶浸出液制备：将10克茶加入100 ml 90℃双蒸水中浸泡30分钟，加入0.8克氯化钠配成等渗原液，0.22 um微孔除菌过滤，收集滤液备用。
1.2实验动物：25只，SD大鼠200~250克，雄性，BALB/C小鼠25~30克，10只。
1.3实验分组与检测指标
1.3.1 实验分组：（1）对照组：在反应体系中加入1/5体积生理盐水。（2）绿茶GPA组与茉莉花茶FPA组：在反应体系中对应加入1/5体积的绿茶与茉莉花茶原液。（3）绿茶GPB组与茉莉花茶FPB组：在反应体系中对应加入1/10体积的绿茶与茉莉花茶原液。（4）绿茶GPC组与茉莉花茶FPC组：在反应体系中对应加入1/20体积的绿茶与茉莉花茶原液。
1.3.2 免疫调节实验：
1.3.2.1 中性粒细胞吞噬实验：取SD大鼠腹主动脉抽取抗凝血，采用明胶生理盐水沉淀法分离血中性白细胞，调细胞浓度为1.0×106/ml，取0.2ml用血浆配置细胞悬液，加入5ul 灭活金葡菌悬液（1×1010/ml），然后根据分组按比例加入绿茶与茉莉花茶原液，37℃孵浴30分钟，取细胞悬液制片，Wright`s 染色，油镜下观察200个中性粒细胞吞噬细菌的情况，计算吞噬率，进行10个样本检测。
1.3.2.2 小鼠脾淋巴细胞转化实验：取BALB/C小鼠脾，撕碎，采用淋巴细胞分离液分离和纯化脾淋巴细胞，调细胞浓度为1.0×106/ml，在96孔板中每孔加入100 ul细胞悬液，并按3.1的实验分组按比例加入绿茶与茉莉花茶原液，在含PHA培养液中培养72小时，取细胞悬液制片，吉姆萨-瑞氏染色，油镜下观察200个细胞中转化的淋巴细胞，计算淋巴细胞转化率。每个实验组为6个复孔。
1.3.3 抑菌实验：实验抑菌纸试片的制备：取直径6.0mm的无菌滤纸片，浸入两种茶液原液中，凉干备用。细菌选择：铜绿假单胞、摩根氏菌、粘质沙雷氏菌、肺炎克雷伯菌、金葡（MRSA）、金葡（25923）、溶血性葡萄球菌。在接种好细菌后，采用贴滤纸片法观察抑菌圈，并测定抑菌圈直径大小。
1.3.4 统计学处理：数据采用t或t` 检验进行处理。
2 、结果
2.1 茉莉花茶、绿茶浸出液的免疫调节情况：具体见表1。茉莉花茶、绿茶浸出液对中性粒细胞的吞噬率无明显的提高，而且两者在各浓度组之间的差异也无显著意义。在较高浓度的GPA、GPB、FPA、FPB组中，脾淋巴细胞转化率均维持在52.6%~63.2%之间，除FPB外，均明显高于对照组的40.1%脾淋巴细胞转化率，但以上四组间无显著差异。此外脾淋巴细胞转化率在FPB组有升高趋势。
2.2 茉莉花茶、绿茶浸出液对中性粒细胞吞噬率与脾淋巴细胞转化率的影响

组别中性粒细胞吞噬率（%）脾淋巴细胞转化率（%）

（n=10）（n=6）

GPA 78.6+8.2 63.2+8.5*

GPB 72.4+12.3 59.4+7.9*

GPC 76.3+6.3 50.6+14.5

FPA 73.6+9.1 60.8+6.3*

FPB 80.4+15.3 52.6+11.9

FPC 68.3+10.8 46.2+9.4

对照组 75.1+8.6 40.1+8.2

2.3茉莉花茶、绿茶浸出液的抑菌实验情况：具体见表2。在实验中发现茉莉花茶、绿茶浸出对菌膜的生长有部分的抑制，形成一定的抑菌圈，而对照组则形成完整的菌膜，提示两者对细菌增殖有一定的抑制效应。

菌名 绿茶浸出液茉莉花茶浸出液

抑菌圈直径（mm）抑菌圈直径（mm）

铜绿假单胞菌         12.0                      8.0

摩根氏菌             10.0                      12.0

粘质沙雷氏菌         6.0                       12.0

肺炎克雷伯菌         13.0                      12.0

金葡（MRSA）         15.0                      13.0

金葡（25923）        15.0                      13.0

溶血性葡萄球菌       12.0                      6.0

3、讨论
本实验从免疫调节和抑菌两方面探讨绿茶与茉莉花茶浸出液的生理与生物学特性，在体外实验中发现，直接将两种浸出液加入中性粒细胞吞噬细菌的反应体系中，并不能显著影响中性粒细胞吞噬细菌的能力，其吞噬率与对照组差异不大，均在70%~80%的范围左右变动。但对于脾淋巴细胞转化率，两种浸出液在较高浓度（原液稀释了1/5和1/10）情况下均可以显著的提高脾淋巴细胞转化率，提示绿茶与茉莉花茶浸出液可以促进PHA诱导的脾淋巴细胞增殖，国内的其它研究结果也报道[ 1]，绿茶可以促进淋巴细胞分泌白介素-2等细胞因子。从免疫学角度分析，中性粒细胞吞噬细菌是机体的非特异性免疫，是抵御细菌入侵的第一道防线，而淋巴细胞转化率是反映细胞免疫的一个指标，细胞免疫是机体抗菌、抗病毒以及抗肿瘤的重要特异性免疫防御系统，是机体调控免疫反应的中枢部分，本实验发现绿茶与茉莉花茶浸出液可以直接促进脾淋巴细胞增殖，提示绿茶与茉莉花茶可以通过调节细胞免疫来提高机体的免疫防御功能，但不能直接促进吞噬细胞吞噬细菌，因此，对于特异性免疫而言，绿茶与茉莉花茶中的相关组分均有一定的调节效应，值得进一步研究。
在抑菌实验中，我们发现绿茶与茉莉花茶浸出液可以部分抑制细菌膜的生长，形成一定直径的抑菌圈，但远远不如敏感的抗生素所形成的抑菌圈，抗生素形成的抑菌圈一般在40~60mm左右，而实验中的绿茶与茉莉花茶浸出液滤纸片形成的抑菌圈只在6~13mm之间。提示两种浸出液有抑菌的趋势，值得提取相关组分进一步做抑菌或杀菌实验，凸现其中组分的抗菌作用。
本实验仅是针对绿茶与茉莉花茶浸出液（综合成分）的前期体外实验，而且是一种短期、直接作用的急性实验，难以说明长期饮茶所引起的生理效应。综合目前的研究与本实验的前期工作，有必要从以下几个方面作进一步的探讨：（1）从绿茶与茉莉花茶中提出相关组分做生物学、生理学、药理学特性的筛选研究，（2）由于茶叶成分众多，体内生物转化过程复杂，应该是体外实验与在体的动物实验相结合，短期的急性实验与长期的慢性实验相结合，探索其生物学特性。

参考文献
1、陈玉春 5类茶叶对正常和血虚小鼠脾淋巴细胞产生白细胞间素－2的影响茶叶科学 1994，14（1）：59~64。

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